中风1号对急性期脑出血大鼠bcl-金沙1005

上海玉研科学仪器有限公司

电话:021-35183767
   021-54377179

传真:021-35183767-8008

qq:3007536034

地址:上海市闵行区兴梅路485号 xingmei rd 485,shanghai,china

当前位置: > 相关文献 > 中风1号对急性期脑出血大鼠bcl-2、bax蛋白表达的影响
相关文献

中风1号对急性期脑出血大鼠bcl-2、bax蛋白表达的影响

时间:2019-11-05来源:本站作者:梁群,王丛,朱永志

[摘要] 目的 通过应用活血化痕中药制剂中风 1 号治疗急性期脑出血大鼠观察脑组织中 bcl-2bax蛋白表达的变化,探讨其作用机制。 方法 以大鼠自体尾静脉取血制作脑出血大鼠模型,造模3 d后断头取脑,应用免疫组织化学法检测脑组织中 bcl-2、bax 免疫反应阳性细胞计数。 结果 造模后经治疗3 d,与模型组相比,中风1号组及甘露醇组 bcl-2阳性细胞数明显升高(p < 0.05),bax阳性细胞数明显降低(p < 0.05),中风1号组与甘露醇组 bcl-2/bax比值远大于1。 结论 活血化痕制剂中风1号通过调控抗凋亡基因 bcl-2、bax的表达,对急性期脑出血起到治疗作用。

 

[关键词]  急性期脑出血  中风1号  活血化痕  bcl-2 bax

 

脑出血属于中医出血性中风范畴[1] 如何降低脑 血管疾病的死亡率和致残率一直是医学界要攻克的重 点。 随着医学界的专家们对急性脑血管疾病的不断探 索, 应用中医中药治疗急性脑出血逐渐受到国内外专 家的重视,临床研究也显示疗效显著[2-4] 中风 1号为本文通信作者朱永志教授总结四十余年治疗急性期脑 出血经验形成的方剂,主要功效为活血化痕。脑出血多 为痕阻脑窍,痕血在急性期不除反而阻碍脑组织血运循环使致残率增加前期动物实验发现中风1号可以 减轻脑水肿、保护神经组织[5],为中医内科保守治疗急 性脑出血奠定了基础。本次实验研究将在前期研究的 基础上进一步明确中风1号治疗急性期脑出血的作用机制。

 

1    材料与方法

1.1 实验动物  spf级别sd雄性大鼠40只,许可证号scxk()2016-0006, 体质量180~220 g,由黑龙江中医药大学动物实验中心代为购买。普通专用饲料喂养于温度(22±4) ℃,相对湿度 40%~70%,自然光线的实验室,经过1周的适应性饲养后进行实验。本

实验严格遵守动物福利与伦理原则, 在黑龙江中医 药大学实验动物管理和使用委员会监督下进行伦理号2017092001。

 

1.2 试药及仪器  1)试剂:兔抗大鼠 bcl-2、bax多克隆抗体购自abcam公司即用型快速免疫组化 max visiontm 试剂盒及dab显色试剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司。2)药物:中风1号(组成:水蛙10 g生大黄 10 g,泽泻 15 g,三七粉 10 g,生地黄 15 g由黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室熬制),按动物体表面积比率换算大鼠灌胃量,常规水煎至 3.5 g/ml(每毫升含生药 3.5 g)。阿莫西林纳舒巴坦纳(哈药集团生产,17070703-2),甘露醇(石家庄四药有限公司生产,1709130503) 3)仪器:大小鼠脑定位仪(上海玉研科学仪器有限公司生产) 脑立体定位进样针(上海玉研科学仪器有限公司生产)、动物颅骨钻(上海玉研科学仪器有限公司生产) 切片机 (德国莱卡生产)、超净工作台(苏净安泰生产)、光学显微镜(日本奥林巴斯公司生产)

 

1.3  分组及造模  sd大鼠40只随机分为4组,每组10只,分别为假手术组、模型组、中风 1 号组、甘露醇 组。 除假手术组外,其余大鼠参照文献[6]的方法制备模型。用 10%水合氯醒按大鼠体质量计算麻醉药用量 进行腹腔注射麻醉。大鼠俯卧位固定于立体定位仪上,充分暴露囱门消毒备皮后切开大鼠头顶部正中线皮肤约1 cm,暴露骨膜及前囱点,在前囱点右侧3.5 mm,后0.2 mm处用牙科钻钻出直径约1.0 mm的圆孔,深达硬 脑膜表面。同时鼠尾用酒精消毒,距尾末端3 cm处剪断用微量注射器抽取50 µl血液,把微量注射器固定在 立体定位仪上,针头沿钻孔进针约6 mm,以20 µl/min速度将50 µl血液缓慢推进脑组织,留针观察约5 min后缓慢出针。在留针期间包扎大鼠尾部伤口。取适量牙科水泥用纯净水调成糊状封闭颅骨创口,待牙科水泥略干后缝合头皮并用腆盼局部消毒,可在伤口表面撒 适量抗生素以防止感染影响指标变化。假手术组:动物 接受与模型组相同的操作但脑组织不注血。

 

1.4 给药方法  在造模后2 h大鼠完全苏醒后开始计时,中风1号组每日2 ml中药汤剂(剂量约为成人用量的1倍)灌胃,假手术组、模型组每日等量生理盐水灌胃,甘露醇组给予大鼠尾静脉注射甘露醇0.5 g/(kg•d),共给药3 d。

 

1.5 标本采集与检  给药3 d后,大鼠吸人麻醉后颈椎离断处死,开颅取脑,以针道为中心,前后各移动2 mm切取4 mm厚脑组织。将切片浸于二甲苯中脱蜡0.5~1 h,乙醇脱水(步骤为100%乙醇5 min、100%乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min),蒸馆水冲洗。在室温下切片,用 3%甲醇双氧水封闭 20~30 min,自来水冲洗采用高压修复之后放人pbs中。 然后用免疫组化笔将组织围住,切片上滴加山羊血清封闭液, 保持在室温20~30 min。 甩去多余液体,不洗,再在切片上滴加目的一抗,4 ℃过夜,次日取出来后待切片恢 复至室温后,放人pbs洗3次,每次5 min。 切片上滴加二抗,37 ℃避光20 min后,放人pbs中洗3次,每次5 min,然后滴加dab染液显色5~10 s,水洗终止显色。最后采用苏木素复染,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,封片完成。选择各组的阳性和阴性组织相进行显微照相; 选择各组有意义的组织相进行读取分析,最后存盘。显微镜下bcl-2和bax阳性反应物在胞浆或胞核有棕色颗粒者为阳性细胞,计数阳性细胞。



………………………………………………………………………………………………………………



文献出自:

中国中医急症 2019年1月第28卷第1期  jetcm. jan. 2019vol.28,no.1

网站地图